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硅胶柱层析的操纵要领及留意事项

发布日期:2021-11-18 17:59浏览次数:

一、硅胶柱层析的道理

   操作吸附道理,即操作硅胶对中药殽杂物中各类身分吸附本领的差别,而使殽杂物中各身分得以疏散的色谱要领。

二、硅胶柱层析的操纵要领及留意事项

1、装柱  

  操纵要点:装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。

有干法装柱和湿法装柱两种要领

 (1)干法装柱:将硅胶通过漏斗装入柱内,中间不该中断,形成一细流逐步插手管内。也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填持续匀称、细密。柱装好后,打开下端活塞,然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内氛围,并保持必然液面。              

 (2)湿法装柱:将最初筹备利用的洗脱剂装入柱内,打开下端活塞,使洗脱剂迟钝流出。然后把硅胶逐步持续不绝地倒入柱内(或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液逐步插手柱内,),硅胶依靠重力和洗脱剂的发动,在柱内自由沉降,此间要不绝把流出的洗脱剂加回柱内保持必然的液面,直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变换为止。然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。按照加样量节制洗脱剂液面至必然高度。

      匀浆法: 搅成匀浆。插手干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充实搅拌。假如洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌;假如洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌。假如不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,假如不与水配伍走分派色谱的话,必需预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥,以撤除1%的醇。假如样品对酸敏感,不能用氯仿体系过柱。

2、上样

  将欲疏散的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中,制成体积小、浓度高的样品溶液,插手层析柱中硅胶面上。如样品不溶于装柱时用的洗脱剂,则将样品溶于易挥发的溶剂中,并插手适量硅胶(不高出柱中硅胶全量的1/10)与其拌匀,除尽溶剂,将拌有样品的硅胶匀称加到柱顶(始终保持洗脱剂有必然的液面),betcmp官网 ,再包围一层硅胶即可。

  上样时留意沿着柱内壁逐步插手,始终保持硅胶上端外貌平整;上样量为硅胶的1/60~1/30。

3、洗脱

  洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选,一般TLC展开时Rf 值为0.2~0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统,回收梯度洗脱法洗脱。

先打开柱下端活塞,保持洗脱剂流速1~2滴/秒。上端不绝添加洗脱剂(可用分液漏斗节制添加快度与下端流出速度临近)。如单一溶剂洗脱结果欠好,可用殽杂溶剂洗(一般不高出三种溶剂),凡是回收梯度洗脱。洗脱剂的洗脱本领由弱到强慢慢递增。

4、收集处理惩罚

等份收集洗脱液,每份收集量或许与所用硅胶的量相当。每份洗脱液回收薄层定性查抄,归并含沟通身分的洗脱液。经浓缩、重结晶处理惩罚往往可获得某一单体身分。如仍为几个单体身分的殽杂物,不易析出单体身分的结晶。则需要进一步层析或用其他要领疏散。


注:(1)柱色谱疏散本领比薄层疏散本领强,结果更好,尤其对布局相似、性质靠近、回收薄层难以疏散的身分疏散结果好。

(2) 洗柱子能不消含水的殽杂溶剂,就只管不要用。

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